煙酰胺的含量測定方法

　　煙酰胺的含量測定方法

　　摘　要：本文通過外標法用來檢測煙酰胺含量值,并且在此條件下能夠檢測煙酰胺的最后的含量值是比較可靠的,基于此煙酰胺和煙酸得可以更好的分離,使之具有準確可靠,專屬性強,穩定簡便等系列特點。

　　關鍵詞：外標法　煙酰胺　含量值

　　一、儀器與材料

　　1.儀器

　　Kromasil C18色譜柱，Agilent LC1100高效液相色譜儀,; Hypersil C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm); ,CP225D電子天平,SHIMADZU UV2450紫外-可見分光光度計。

　　2.材料

　　煙酰胺對照品;煙酰胺;磷酸二氫鉀,分甲醇,乙腈,色譜純。

　　二、方法與結果

　　1.色譜條件

　　采用Agilent 110型高效液相色譜儀,Kro-masil C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),流動相:磷酸二氫鉀溶液(0.01mol.L-1)-水-甲醇-乙腈(1/79/15/5);流速0.8 mL.min-1;柱溫:20.0℃檢測波長:262nm;進樣量:10μL。柱溫:室溫。

　　2.測定方法

　　量測定:精密稱取本品約10mg,置100mL量瓶中,加水適量,振搖使溶解,用水稀釋至刻度,搖勻,做為供試品溶液(100μg.L-1),精密量取10μL,照2.1項下的色譜條件,注入液相色譜儀,另取煙酰胺對照品適量,加水溶解并稀釋制成含煙酰胺100μg.L-1的對照品溶液,同法測定。按外標法以峰面積計算含量。

　　3.線性試驗

　　3.1精密稱取煙酰胺對照品0.04055g置100mL量瓶中,加水溶解并稀釋成含煙酰胺405.5μg.mL-1的濃對照品溶液,并稀釋成2.028～405.5μg.mL-1的6個濃度的溶液(精密吸取濃對照品溶液1mL,分別置200mL、100mL、50mL、25mL量瓶中;精密吸取3mL、5mL,分別置25mL量瓶中,分別加水稀釋至刻度),另取濃對照品溶液,形成7個濃度的溶液,照2.1項下的色譜條件進樣10μL ,以峰面積Y對濃度X(μg.L-1)作線性回歸,結果:在2.028～405.5μg.mL-1濃度范圍內,測得的峰面積與與煙酰胺溶液的濃度呈良好的線性關系:Y=19.76X+3.565,r=0.9999。

　　即采用此法對煙酰胺進行定量分析是可行的。

　　4.定量限、最小檢出量試驗

　　精密稱取煙酰胺對照品適量,加水溶解并稀釋成含煙酰胺2.028μg.mL-1的的溶液,照2.1項下的色譜條件進樣10μL,結果S/N=10.6,定量限為20.28ng。精密稱取煙酰胺對照品適量,加水溶解并稀釋成含煙酰胺0.477μg.mL-1的溶液,照2.1項下的色譜條件進樣10μL,結果S/N=2.5,最小檢出量為4.77ng。

　　5.系統精密度、重復性及溶液的穩定性試驗

　　精密量取2.2.1項下的對照品溶液10μL,照2.1項下的色譜條件分別連續進樣6次,以峰面積計算,結果:RSD為0.1%。取批號為080805的樣品,照2.2.1項下的方法配制6份供試品溶液,照2.1項下的色譜條件進樣10μL,以外標法計算,分別為標示量的99.4%, 99.7%, 99.5%, 99.5%,99.8%,100.5%,RSD為0.3%。取2.6重復性試驗項下的其中1份供試品溶液,室溫下放置,分別于0,2,4,8,12,24,30h測定,30h內主成分峰面積的RSD分別為0.2%,表明供試品溶液在30h內基本穩定。

　　6.加樣回收率試驗

　　精密量取量按2.2.1項下制備的對照品溶液1,5,10mL分別置25mL量瓶中,分別精密量取按2.2.1項下制備的供試品溶液10mL加入其中,加水稀釋至刻度。照2.1項下的色譜條件進樣10μL,以外標法峰面積計算。結果底、中、高3個濃度的回收率分別為100.1,101.7%,103.2%,RSD為0.2%,0.2%,0.5%。平均回收率(n=9)為101.7%。

　　7.系統耐用性試驗

　　保持其他色譜條件不變,只改變下述色譜條件:①流速改為1.0mL.min-1,柱溫不變(20℃);②柱溫設為30℃,流速為0.8mL.min-1;③更換其他品牌相同類型色譜柱。取2.1項下對照品溶液,測定主成分峰的理論板數及相鄰有關物質峰與主成分峰的相對保留時間、理論板數。結果表明,在改變上述色譜條件的情況下,相鄰有關物質峰與主成分峰的相對保留時間較穩定，其值約為0.8，理論板數均大于8000，分離度均大于7.0。

　　8.樣品測定

　　精密稱取批號為080805的樣品2份,照2.2.1項下的方法制備供試品溶液;另精密稱取煙酰胺對照品約10mg置100量瓶中,加水溶解并稀釋制成對照品溶液,照2.1項下的色譜條件進樣10μL,以外標法計算,測得含量為標示量的99.9%,RSD為0.2%。

　　三、討論

　　1.檢測波長的選擇

　　精密稱取煙酰胺對照品適量,分別用水和流動相溶解并稀釋成20μg.L-1的溶液,分別掃描,兩者的最大吸收波長均為262nm,所以選擇262nm作為本法的測定波長。

　　2.中間體的分離效果驗證

　　從合成工藝看,煙酰胺是由β-甲基吡啶,經空氣氧化生成煙酸,與氨水作用生成β-吡啶甲酸銨,最后加熱脫水生成。從藥理作用看,煙酰胺作用與煙酸類似,較煙酸易于耐受;煙酸有擴張血管作用,煙酰胺無擴張血管作用。若能分離檢測出煙酰胺中含有的煙酸,對控制煙酰胺藥品質量具有意義。

　　所以選擇煙酰胺有關物質中可能存在的、合成工藝中重要的中間體的煙酸,作為代表性中間體,驗證本色譜條件對煙酰胺中可能存在的中間體分離效果,即稱取煙酸工作對照品與煙酰胺對照品適量,加水溶解制成分別含煙酸和煙酰胺20μg.mL-1混合溶液,按照2.1的色譜條件進樣,結果分離良好,煙酸與煙酰胺分離度大于10.0。

　　參考文獻

　　[1]國家藥典委員會編中國藥典[S].2011版,二部,632.

　　[2]李小燕,劉淑英.HPLC法測定煙酰胺的含量[J].中國藥事,2010,17(3):405.

　　[3]李正化.藥物化學[S].第二版.北京:人民衛生出版社,2010 .

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