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不同白英藥材中總皂苷含量差異探究論文
白英為茄科植物Solanum lyratum Thunb.的干燥全草，性微寒，味苦。最早見于《本經》記載，列為上品，為傳統中藥，具有清熱解毒、祛風化痰、除濕等功效，用于治療癌癥腫瘤、皰疹、瘧疾、黃疸、水腫、淋病、風濕性關節炎、白帶異常等病證。
不同白英藥材中總皂苷含量差異探究論文
【摘要】 目的建立白英中總皂苷的含量測定方法。
方法選用薯蕷皂苷元為對照品，采用分光光度法，高氯酸顯色，在410 nm處測定吸光度，計算白英中總皂苷含量。
結果薯蕷皂苷元的質量濃度在8.91～29.70μg/ml范圍內與吸光度值呈良好線性關系(r=0.999 2)，方法的平均回收率為95.9%(n=9)，RSD為1.5%;不同來源的白英藥材中總皂苷含量有較大差異。
結論該方法操作簡便、準確、靈敏、重現性好，可用于白英藥材的質量控制。
【關鍵詞】 白英 總皂苷 薯蕷皂苷元 分光光度法
白英為茄科植物Solanum lyratum Thunb.的干燥全草，性微寒，味苦。
最早見于《本經》記載，列為上品，為傳統中藥，具有清熱解毒、祛風化痰、除濕等功效，用于治療癌癥腫瘤、皰疹、瘧疾、黃疸、水腫、淋病、風濕性關節炎、白帶異常等病證。
白英含有多種化學成分，主要有甾體皂苷類、甾體生物堿類、有機酸類等化合物，其中皂苷類成分主要包括以薯蕷皂苷元、替高皂苷元、雅姆皂苷元等皂苷元為非糖部分的多種甾體皂苷。
藥理研究顯示白英中總皂苷體內外具有一定的抗腫瘤作用，且存在一定的選擇性。
因此，測定白英中總皂苷的含量對評價白英藥材質量具有重要意義。
總皂苷的測定方法有重量法，UV，TLCS，HPLC，GC-MS法。
目前有關白英中總皂苷的含量測定尚未見報道，本文建立了用UV測定白英中總皂苷含量的方法，并比較了24種不同來源的白英中總皂苷的含量，為白英的質量控制提供一定的依據。
一、儀器與材料
紫外分光光度計(上海棱光技術有限公司)、旋轉蒸發器 (RE-52AA，上海亞榮儀器廠)、水浴鍋(鞏義市杜甫儀器廠)。
薯蕷皂苷元標準品(中國藥品生物制品檢定所提供，I539-200001，含量測定用)，無水乙醇(AR，天津百盛化工有限公司)，甲醇(AR，山東禹王實業有限公司)，三氯甲烷(AR，沈陽經濟技術開發區試劑廠)，鹽酸(AR，天津市大茂化學試劑廠)，高氯酸(AR，天津市東方化工廠)。
24種不同來源的白英藥材均由沈陽藥科大學孫啟時教授鑒定為茄科植物Solanum lyratum Thunb. 的干燥全草。
二、方法與結果
2.1 對照品溶液的制備精密稱定薯蕷皂苷元對照品約3 mg，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容即得。
2.2 樣品溶液的制備精密稱定1.0 g白英藥材，置索氏提取器內，加60 ml三氯甲烷脫脂2 h后，揮去三氯甲烷溶劑;用200 ml 80%乙醇在80℃下提取至無色，
將乙醇液旋轉蒸發至干;殘渣加2.5 mol·L-1鹽酸50 ml加熱回流3 h，過濾;冷卻后用三氯甲烷分3次(30，20，20 ml)回流萃取，15 min/次;合并三氯甲烷萃取液,水洗至中性，水洗液再加入20 ml三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷萃取液，水浴蒸干溶劑,殘渣用甲醇溶解并定容至10.0ml即得。
2.3 吸收光譜的測定分別精密量取薯蕷皂苷元對照品溶液與樣品溶液1.0 ml，置水浴中揮干溶劑，精密加入10.0 ml高氯酸，搖勻。
65℃水浴加熱15 min，取出立即置于冰水浴中15 min后，以空白作參比，在200～600 nm波長范圍內繪制吸收曲線，薯蕷皂苷元在405 nm處有最大吸收，樣品溶液在405～412 nm處有較強吸收，故選擇410 nm作為測定波長。
2.4 標準曲線的制備精密吸取對照品溶液0.3，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，分別置于三角瓶中，揮干溶劑，精密加入10.0 ml高氯酸，搖勻。
65℃水浴加熱顯色15 min，取出后立即置于冰水浴中15 min后停止反應，以空白作參比，在410 nm處測定吸光度值。
計算得回歸方程為A=0.027 6C+0.005 5，r=0.999 2，結果表明薯蕷皂苷元在8.91～29.70 μg/ml范圍內與吸光度呈良好的線性關系。
2.5 正交實驗法對制備樣品溶液的優選本實驗選定鹽酸濃度(mol/L)、乙醇體積分數(%)、水解時間(h)作為考察因素，每個因素各取3個水平，以總皂苷含量為評價指標，應用L9(34)正交表安排實驗。
因素水平表見表1，正交實驗結果見表2。
通過直觀分析表明：影響因素的主次順序為水解時間>鹽酸濃度>乙醇體積分數，經過分析，選擇優化條件為：水解時間3 h，鹽酸濃度2.5 mol/L，乙醇體積分數80%。
2.6 穩定性實驗準確吸取樣品溶液1.0 ml，按“吸收光譜的測定”項下顯色，于410 nm波長處每隔10 min測定其吸光度，結果表明樣品溶液的RSD為0.4%，樣品溶液顯色后在60 min內穩定性良好。
2.7 精密度實驗精密吸取對照品溶液1.0 ml，共5份，按“吸收光譜的測定”項下顯色，410 nm波長處測定，RSD為0.8%。
實驗結果表明，方法的精密度良好。
2.8 重復性實驗取樣品5份，按樣品溶液的制備法和顯色法，依法測定，計算樣品中總皂苷含量。
平均總皂苷含量2.12 mg·g-1，RSD=1.4%(n=5)，表明方法的重復性良好。
2.9 回收率實驗準確稱取一定量已知總皂苷含量的白英樣品，每份0.5 g，加入一定量的薯蕷皂苷元對照品，按樣品溶液的制備和測定步驟進行，計算得回收率。
2.10 樣品的測定準確吸取樣品溶液1.0 ml，按“吸收光譜的測定”項下進行測定。
分別測定了24種不同來源的白英藥材中總皂苷的含量。
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從上表中可以得出：不同來源的白英中總皂苷含量不同，產于江蘇與昆明的白英中總皂苷含量最高。
三、討論
皂苷一般易溶于熱水、含水乙醇、熱甲醇、熱乙醇，幾乎不溶或難溶于乙醚、苯、石油醚等極性較小的有機溶劑。
考慮到甲醇對身體有害，無水乙醇提取不完全等因素，選擇乙醇水溶液作為提取溶劑。
根據文獻選用含一定濃度的甲醇水溶液和石油醚(氯仿)回流提取，用TLC檢查得不到薯蕷皂苷元的斑點。
原因是苷類水解時有醇存在，長時間加熱可引起其他副反應，皂苷元往往會發生脫水、環合、雙鍵位移和構型改變等變化。
在實驗過程中根據文獻采用活性炭脫色5 min，結果測定吸光度值非常小，原因是活性炭吸附某些苷類物質。
比色法所顯顏色隨顯色溫度和時間變化而變化，因此，必須嚴格控制條件，盡量排除干擾。
本實驗選用的顯色條件穩定。
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