田七顆粒質量標準研究

　　畢業論文是教學科研過程的一個環節，也是學業成績考核和評定的一種重要方式。畢業論文的目的在于總結學生在校期間的學習成果，培養學生具有綜合地創造性地運用所學的全部專業知識和技能解決較為復雜問題的能力并使他們受到科學研究的基本訓練。

　　【摘要】 目的 建立田七顆粒的質量標準。方法 采用TLC法對處方中的三七進行定性鑒別,用HPLC法對制劑中人參皂苷Rg1與三七皂苷R1進行定量測定。結果 在TLC鑒別中能檢出三七,人參皂苷Rg1在0.628～5.652 μg(r=0.999 8)、三七皂苷R1在0.155～1.395 μg(r=0.999 8)范圍內呈良好的線性關系,平均回收率分別為99.24%(RSD=0.84%)和99.14%(RSD=1.13%)。結論 本方法操作簡便,準確,重復性好,精密度高,可作為該制劑的質量控制方法。

　　【關鍵詞】 田七顆粒;薄層色譜法;人參皂苷Rg1;三七皂苷R1;高效液相色譜法

　　田七顆粒主要以三七為原料加工制成,具有活血定痛、祛瘀生新的作用。三七主要含人參皂苷Rb1、Rg1、Re和三七皂苷R1等20余種皂苷成分,其中人參皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷R1是含量最高的3個成分,三七皂苷R1又是三七的特征性成分[1]。本試驗對制劑的質量標準進行了研究,用TLC法對處方中的三七進行了定性鑒別,并采用HPLC法測定田七顆粒中人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量,方法簡便,準確,重現性好,可作為該制劑的質量控制方法。

　　1 儀器與試藥

　　Agilent1100系列高效液相色譜儀：G1311A四元泵,G1313A自動進樣器,G1379A脫氣機,G1314VWD檢測器,Agilent1100化學工作站;UV-2201型紫外-可見分光光度儀。

　　田七顆粒,廣西玉林制藥有限責任公司生產;人參皂苷Rg1和三七皂苷R1對照品(供含量測定用,批號：人參皂苷Rg1為0703-9914、0703-9813,三七皂苷R1為0745-200109),均由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇、乙腈為色譜純,其余試劑均為分析純。

　　2 定性鑒別

　　取本品2 g,研細,加甲醇20 mL,超聲處理30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇2 mL使溶解,作為供試品溶液。另取缺三七的陰性對照品2 g,同法制成陰性對照品溶液。再取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷 R1對照品,分別加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗,吸取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照液各2 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1對照品相應的位置上,顯紅色的斑點,而陰性對照液無相應斑點。

　　3 含量測定

　　3.1 色譜條件

　　Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液(18∶82);流速：1.0 mL/min;檢測波長：203 nm;柱溫：30 ℃;進樣量：10 μL。理論塔板數按三七皂苷R1計算應不低于3 000。

　　3.2 對照品溶液的制備

　　分別精密稱取人參皂苷Rg1和三七皂苷R1對照品適量,加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg1 0.396 mg和三七皂苷R1 0.092 mg的混合溶液,搖勻,即得。

　　3.3 供試品溶液的制備

　　取本品適量,研細,取約1.2 g,精密稱定,加水適量使溶解并轉移至分液漏斗中,用水飽和的正丁醇萃取3次,每次20 mL,合并正丁醇萃取液,加氨試液洗滌2次,每次20 mL,棄去氨試液,正丁醇層蒸干,殘渣加甲醇溶解并移入10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,用0.45 μm濾膜濾過,作為供試品溶液。

　　3.4 空白試驗

　　按處方及制備工藝制備不含三七藥材的陰性樣品,再按供試品溶液的制備方法制備并測定。按照上述色譜條件,吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL,分別注入色譜儀,進行測定。結果供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,分別有相同保留時間的色譜峰,而陰性對照在此保留時間無干擾(見圖1)。因此,可在此系統條件下對人參皂苷Rg1和三七皂苷R1進行定量分析。

　　3.5 線性關系的考察

　　精密稱取人參皂苷Rg1對照品31.4 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,作為人參皂苷Rg1對照品貯備液(0.628 mg/mL)。分別精密吸取貯備液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL,分別置于10 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成濃度分別為0.062 8、0.188 4、0.314 0、0.439 6、0.565 2 mg/mL的溶液。分別精密吸取10 μL,注入液相色譜儀,記錄峰面積。以人參皂苷Rg1對照品進樣量(μg)為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程：Y=209.713X-0.260,r=0.999 8,人參皂苷Rg1在0.628～5.652 μg范圍內呈良好的線性關系。

　　精密稱取三七皂苷R1對照品7.75 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,作為三七皂苷R1對照品貯備液(0.155 mg/mL)。分別精密吸取貯備液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL,分別置于10 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成濃度分別為0.015 5、0.046 5、0.077 5、0.108 5、0.139 5 mg/mL的溶液。分別精密吸取10 μL,注入液相色譜儀,記錄峰面積。以三七皂苷R1對照品進樣量(μg)為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程：Y=208.065X-2.85,r=0.999 8,三七皂苷R1在0.155～1.395 μg范圍內呈良好的線性關系。

　　3.6 精密度試驗

　　取對照品溶液,重復進樣6次,測定峰面積,人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的RSD分別為0.56%和0.69%,表明精密度良好。

　　3.7 重復性試驗

　　取同一批號(030102)的田七顆粒,共6份,按“3.3”項制備,進樣,測定峰面積,人參皂苷Rg1平均含量為3.708 mg/g, RSD=1.01%;三七皂苷R1平均含量為0.698 mg/g,RSD=0.92%。

　　3.8 穩定性考察

　　精密吸取同一供試品溶液,分別于制備后12 h內每隔2 h進樣1次,測定峰面積,人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的RSD分別為1.52%和1.47%,表明樣品溶液在12 h基本穩定。

　　3.9 加樣回收率測定

　　取已知含量的樣品(人參皂苷Rg1含量3.708 mg/g和三七皂苷R1含量0.698 mg/g)6份,精密稱定,分別精密加入人參皂苷Rg1對照品貯備液4.5 mL和三七皂苷R1對照品貯備液3.5 mL,揮干甲醇后,按供試品溶液的制備方法制備,根據上面色譜條件測定峰面積,計算回收率,結果見表1、表2。 表1 人參皂苷Rg1加樣回收率試驗結果(略)表2 三七皂苷R1加樣回收率試驗結果(略)

　　3.10 樣品測定

　　分別精密吸取10 μL對照品溶液和供試品溶液,按上述色譜條件,注入色譜儀,測定,結果見表3。表3 樣品測定結果(略)

　　4 討論

　　在定性鑒別項下,曾選用氯仿-甲醇-水(65∶35∶10) 10 ℃以下的下層液作為展開劑,但其相對濕度應控制在50%左右,濕度過高容易使斑點變形移位,所以選用了本試驗的正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)的上層溶液為展開劑。在含量測定項下,供試品溶液制備中還比較了另外的提取方法：乙醚脫脂和超聲提取,結果比本文的含量稍低,所以選擇了本試驗的提取方法。參考文獻[2],采用乙腈-0.05%磷酸溶液(23∶77),人參皂苷Rg1與三七皂苷R1分離好,但人參皂苷Rg1與其右側干擾峰分不開,調整乙腈-0.05%磷酸溶液比例為(18∶82)時,人參皂苷Rg1峰形好,跟干擾峰能達到很好的分離效果。

　　【參考文獻】

　　[1] 饒高雄,王興文.三七皂甙的檢測與分析方法[J].云南中醫學院學報, 2001,24(3)：4.

　　[2] 馮毅凡,孟 青,梁漢明.田七痛經膠囊質量標準研究[J].中成藥, 2005,27(10)：1146.

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