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HPLC法同時測定復方利血平氨苯蝶啶片中3組分的含量論文
目的 建立測定復方利血平氨苯蝶啶片中氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶含量的方法。方法 采用高效液相色譜法，以氰基柱(4.6 mm × 250 mm，10 μm)為色譜柱，以0.01 mol/L庚烷磺酸鈉溶液（用體積分數20%磷酸調節pH值至2.7）?乙腈（體積比85∶15）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長為316 nm。結果 氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶分別在60～180 μg/mL的濃度范圍內有良好的線性關系(r=0.999 9)；氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶平均加樣回收率分別為100.2%、100.1%和100.3%，RSD值分別為0.36%、0.85%和0.83% （n=9）。結論 本方法簡便、快速、準確度高，可用于復方利血平氨苯蝶啶片的質量控制。Abstract:Objective To establish an HPLC method for simultaneous determination of hydrochlorothiazide, dihydralazine sulfate and triamterene in compound reserpine? triamterene tablets. Method Samples were analyzed on a reversed?phase CN column (4.6 mm × 250 mm，10 μm) with 0.01 mol/L sodium heptanesulfonate (adjusted with 20% H3PO4 to pH2.7)?acetonitrile (85∶15) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength 316 nm. Results The calibration curves were linear over the range of 60～180 μg/mL(r=0.999 9) for hydrochlorothiazide, dihydralazine sulfate and triamterene. The average recoveries were 100.2% (RSD=0.36%, n=9) for hydrochlorothiazide, 100.1% (RSD=0.85%, n=9) for dihydralazine sulfate, and 100.3% (RSD=0.83%, n=9) for triamterene. Conclusion The method is simple, sensitive and accurate, which could be used for the quality control of compound reserpine?triamterene tablets.
Key words:HPLC；compound reserpine?triamterene tablets；hydrochlorothiazide；dihydralazine sulfate； triamterene
復方利血平氨苯蝶啶片是由氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平制成的復方制劑，用于治療輕、中度高血壓，氫氯噻嗪和氨苯蝶啶合用能增強利尿作用，硫酸雙肼屈嗪和利血平合用對降壓效果有協同作用，收載于國家藥品標準：化學藥品地方標準上升國家標準第十三冊［1］。原標準用HPLC法分析，分別用不同波長，不同溶劑各自測定氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶的含量，方法費時、麻煩。有關高效液相色譜法測定復方降壓片中三組分含量的研究曾有報道［2］，但該方法是測定利血平、氫氯噻嗪和氯氮革的含量，現國家標準處方已刪去氯氮革成分。本文參考國家標準，采用高效液相色譜法同時測定復方利血平氨苯蝶啶片中的氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶的含量，方法快速、簡便、準確，穩定性、重現性好，適用于本品的質量控制。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
島津LC?10AT型高效液相色譜儀，SPD?10A型紫外檢測器，HW?2000色譜工作站。
1.2 試藥
氫氯噻嗪對照品（批號：10039-200001）、硫酸雙肼屈嗪對照品（批號：100514-200301）、氨苯蝶啶對照品（批號：100429-200401）均由中國藥品生物制品檢定所提供；乙腈為色譜純，庚烷磺酸鈉、磷酸為分析純，水為去離子水，復方利血平氨苯蝶啶片（北京雙鶴藥業有限公司生產，批號分別為070603 D，071004 D，071012 C）。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱：Spherisorb CN柱（4.6 mm × 250 mm，10 μm）；流動相：0.01 moL/L庚烷磺酸鈉溶液（用體積分數20%磷酸調節pH值至2.7）?乙腈（體積比85∶15）；柱溫：40 ℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：316 nm；進樣量：20 μL。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對照品溶液的制備
精密稱取105 ℃干燥1 h后的氫氯噻嗪對照品和80 ℃減壓干燥4 h后的硫酸雙肼屈嗪對照品和氨苯蝶啶對照品適量，加甲醇?水（體積比30∶70）超聲處理使溶解并制成各含0.12 mg/mL的對照品溶液。
2.2.2 供試品溶液的制備
取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于氫氯噻嗪12.5 mg），置100 mL量瓶中，加甲醇?水（體積比30∶70）適量，超聲處理20 min，放冷，加甲醇?水（體積比30∶70）稀釋至刻度，搖勻，離心（3000 r/min）10 min，取上清液為供試品溶液。取甲醇?水（體積比30∶70）為空白溶液。
取對照品、供試品和空白溶液，按上述色譜條件各進樣20 μL，記錄色譜圖，見圖1。
2.3 線性試驗
精密稱取氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶對照品各30 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇?水（體積比30∶70）適量，超聲處理并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分別置20 mL量瓶中，加甲醇?水（體積比30∶70）稀釋至刻度，搖勻，各進樣20 μL，按上述色譜條件測定。以峰面積（A）對濃度（ρ）進行回歸， 得回歸方程氫氯噻嗪為ρ=0.0001293A+5.606，r=0.999 9；硫酸雙肼屈嗪為ρ=0.0002904A+24.531， r=0.999 9； 氨苯蝶啶為ρ=0.000106A+10.779， r=0.999 9；表明3種成分在60～180 μg/mL的濃度范圍內線性關系良好。
2.4 精密度試驗
取“2.2.1”項下的對照品溶液，重復進樣6次，記錄其峰面積，計算得氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶峰面積的RSD分別為0.38%、0.64%和0.45%，表明方法的精密度良好。
2.5 重復性試驗
取復方利血平氨苯蝶啶片（批號：071004 D）按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.8”項下方法測定含量，結果分別為：氫氯噻嗪98.3%，RSD=0.86%，n=6；硫酸雙肼屈嗪104.6%，RSD=0.61%，n=6；氨苯蝶啶99.4%，RSD=0.84%，n=6。表明本法重復性好。
2.6 穩定性試驗
取“2.2.1”項下的對照品溶液，在室溫條件下放置，分別在0、1、2、4和8h進樣，記錄色譜圖，計算各峰面積的RSD分別為氫氯噻嗪0.36％，硫酸雙肼屈嗪 0.89％，氨苯蝶啶0.72％，表明溶液在室溫放置8 h內穩定。
2.7 加樣回收試驗
取已知含量的片粉（批號：070603 D），分別精密稱定適量（約相當于氫氯噻嗪2.5、3.0和3.6 mg）置50 mL量瓶中，各3份，分別精密稱定氫氯噻嗪，硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶對照品約2.5、3.0和3.6 mg各3份，加入上述量瓶中，按“2.2.2”項下的方法，自“加甲醇?水（體積比30∶70）適量……起”操作，配制成相當于含量測定濃度的80％、100％、120％的溶液，各進樣20 μL，記錄色譜圖，計算回收率，結果見表1-3。表1 氫氯噻嗪回收率試驗結果（略）表2 硫酸雙肼屈嗪回收率試驗結果（略）表3 氨苯蝶啶回收率試驗結果（略）
2.8 樣品含量測定
分別取上述對照品與供試品溶液20 μL，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，以外標法計算樣品中氫氯噻嗪，硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶的含量，結果見表4。表4 樣品含量測定結果（略）
3 討 論
3.1 取氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶對照品溶液分別進行紫外掃描，氫氯噻嗪在 270 nm和316 nm波長處有最大吸收，硫酸雙肼屈嗪在313 nm波長處有最大吸收，氨苯蝶啶在363 nm波長處有最大吸收。由于在316 nm波長處測定氫氯噻嗪和氨苯蝶啶同樣有較高的靈敏度，故選用氫氯噻嗪有最大吸收的316 nm作為測定波長。
3.2 供試品溶液制備過程中，曾用流動相、甲醇?水（體積比30∶70）等溶劑進行溶解試驗，結果表明，本文選用甲醇?水（體積比30∶70）作溶劑，超聲處理20 min可同時溶解3種成分，效果較好，且操作簡便。用流動相為溶劑時，硫酸雙肼屈嗪在酸性流動相介質中不穩定，峰面積在30 min內下降約30％。
3.3 本文用HPLC法同時測定復方利血平氨苯蝶啶片中的氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪和氨苯蝶啶的含量，操作簡便，快捷，靈敏度高，重復性好，測定結果準確，可用于復方利血平氨苯蝶啶片的質量控制。
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