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醫學生畢業論文

時間:2022-10-06 20:43:40 醫學分類醫學畢業論文 我要投稿
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  1 材料與儀器

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  1.1 材料及處理水芹菜采于湖北民族學院后山。將新鮮水芹菜洗凈,于60℃烘箱中烘干,粉碎,過孔徑60目篩,裝于棕色試劑瓶備用。

  1.2 藥品大孔吸附樹脂NKA、NKA-9、X-5、AB-8(天津南開大學生產);蘆丁標準品(進口分裝),95%乙醇, 亞硝酸鈉, 硝酸鋁,氫氧化鈉,以上試劑均為分析純。

  1.3 儀器AL204電子天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司),LXJ-ⅡB離心機(上海安亭科學儀器廠制造), RE-201D旋轉蒸發儀(鞏義市予華儀器有限責任公司),可見光分光光度計(上海棱光技術有限公司)。

  2 方法

  2.1 樹脂的預處理[9]將各種大孔吸附樹脂,分別用95%的乙醇浸泡24 h,并不時用玻璃棒攪拌,使樹脂和乙醇充分接觸,以便從孔中趕出空氣。將浸泡好的樹脂上柱先用95%的乙醇沖洗,直至流出液無白色為止。然后用2 BV(2倍的上柱的大孔樹脂的體積)的4%的NaOH沖洗,并關閉30 min,用蒸餾水洗至中性。再用2 BV的5%HCl沖洗 ,并關閉30 min,最后用蒸餾水洗至中性,處理完畢后用蒸餾水浸泡保存。

  2.2 水芹菜黃酮粗提液的制備稱取一定量的樣品,料液比1∶35,乙醇濃度80%,在90℃的水浴鍋中回流提取2.5h,5 000 r/min離心15 min,取其上清液。將上清液在旋轉蒸發儀中濃縮,濃縮液5 000 r/min離心15 min,取其上清液,即得到黃酮粗提液。

  2.3 水芹菜黃酮測定方法[10]水芹菜黃酮含量測定采用以蘆丁為對照品的NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色比色法。

  2.4 大孔樹脂靜態吸附稱取各種濾干濕大孔樹脂1 g,放入相同型號的燒杯中,加入黃酮粗提液20 ml,放入電動振蕩器上,振蕩吸附24 h,過濾,吸取吸附后的溶液0.4 ml測其吸光度,計算出樹脂在室溫下的吸附量和吸附率。取吸附飽和的樹脂,加入80%的乙醇20 ml,浸泡振搖4 h,過濾,取解吸后的溶液0.3 ml,測定濾液中黃酮的濃度,根據黃酮解吸量計算解吸率。

  2.5 AB-8大孔樹脂動態吸附上柱速率測定:取處理好的AB-8大孔吸附樹脂8g,裝柱約10 cm高。將6份50 ml 0.3mg·ml-1的黃酮粗提液分別以0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 ml·min-1的速率進行上柱,再用5 BV的水洗柱,80%乙醇5 BV洗脫,然后測定其吸附率。

  乙醇解吸濃度確定:將5份50 ml 0.3 mg ·ml-1的黃酮粗提液分別以1.5ml·min-1的速率進行上柱,再用5 BV的水洗柱,分別用5 BV20%,40%,60%,80%,95%的乙醇進行洗脫,然后測其解吸率。乙醇洗脫體積確定:將6份50 ml 0.3 mg·ml-1的黃酮粗提液分別以1.5 ml·min-1的速率進行上柱,再用5 BV的水洗柱,分別用80%的乙醇2,4,5,6,7,8 BV進行洗脫,然后測其解吸率。乙醇洗脫速率測定:將5份50 ml 0.3mg·ml-1的黃酮粗提液分別以1.5 ml·min-1的速率進行上柱,再用5 BV的水洗柱,分別以0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 ml·min-1的速率進行洗脫,洗脫劑為80%的乙醇5 BV,然后測其解吸率。

  3 結果

  上樣速率的選擇上樣速率一般都要求較慢,這是因為流速過快,吸附效果差,吸附不完全。但是流速過慢,會延長生產周期,增加成本。因此有必要選擇一個合適的上樣速率使之既能達到一定的吸附率又能盡可能的節約時間。實驗按“2.5”項的方法測定了上樣速率對吸附效果的影響,(見表4)。吸附率隨上樣速率的增快而降低,黃酮吸附率和上樣流速呈極顯著線性負相關,線性回歸方程為:Y=-4.314 8X+83.809 3(Y:吸附率%,X:上樣流速ml·min-1)。但是在綜合考慮吸附率和應用于生產中的周期長短,選取 1.5ml·min-1的上樣流速。

  乙醇洗脫體積的選擇在確定了乙醇的最佳濃度之后,進一步對洗脫液的最佳用量進行了確定,其原則是在充分洗脫所吸附黃酮的前提下,盡量節省洗脫劑的用量。從表6可以看出,當乙醇的洗脫用量達到5 BV時,解吸率為73.22.%,超過5 BV時,解吸率基本不再增加。因此,本實驗所采用的乙醇洗脫體積為5 BV。

  樹脂的富集能力配制黃酮濃度為0.3 mg·ml-1的黃酮水溶液50 ml,以1.5 ml·min-1的速率進行上柱,再用5 BV的水洗柱,以1.0 ml·min-1的速率進行洗脫,洗脫劑為80%的乙醇50 ml。收集流出液、水洗液及解吸液,測得解吸液黃酮濃度為0.212 mg·ml-1。分別取20 ml上柱前黃酮濃度為0.3 mg·ml-1的黃酮水溶液和上柱后的解吸液,在旋轉蒸發儀中濃縮,烘干,冷卻。測得純化前黃酮純度為9.98%,純化后純度為25.8%,黃酮回收率為70.53%。

  本實驗主要對4種不同型號的大孔吸附樹脂NKA、NKA-9、X-5、AB-8對水芹菜黃酮粗提物的靜態吸附和解吸性質進行了研究,發現AB-8大孔吸附樹脂在幾種常用的用于富集黃酮的大孔樹脂中吸附與解吸能力最好,并通過動態吸附實驗對上樣速率、解吸液濃度、解吸液體積及洗脫速率進行了研究,確定該樹脂的最佳條件為:以1.5 ml·min-1的流速上樣后,然后用5BV80%的乙醇以1.0 ml·min-1的速率洗脫。

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