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痛風(fēng)靈膠囊鎮(zhèn)痛作用及機(jī)制初探論文

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痛風(fēng)靈膠囊鎮(zhèn)痛作用及機(jī)制初探論文

  目的 觀察痛風(fēng)靈膠囊的鎮(zhèn)痛效果,并探討其作用機(jī)制。 方法 采用熱刺激引起小鼠疼痛反應(yīng)法、冰醋酸刺激引起小鼠扭體反應(yīng)法,以及甲醛法引起小鼠足疼痛反應(yīng),觀察其鎮(zhèn)痛作用,并采用甲醛疼痛模型觀察其對(duì)炎癥局部組織中前列腺素(PGE2)的影響。 結(jié)果 痛風(fēng)靈膠囊可以明顯抑制醋酸導(dǎo)致的小鼠扭體反應(yīng), 但對(duì)熱刺激所致小鼠疼痛無(wú)明顯鎮(zhèn)痛作用,對(duì)甲醛所致小鼠第二相反應(yīng)有明顯抑制,降低炎癥組織中的PGE2含量。結(jié)論 痛風(fēng)靈膠囊對(duì)外周性疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用,其機(jī)制與抑制炎癥組織中PGE2生成有關(guān)。
  
  Abstract:Objective To investigate the analgesic effects and mechanism of Tongfengling(TFL) capsules. Methods  Analgesic effects of TFL were observed with pain model mice induced with hot plate, writhing response induced with acetic acid and mouse formalin test. The content of PGE 2 was measured in mouse formalin test. Results TFL capsules could not elevate the pain threshold, but could inhibit writhing response and second phase of formalin test in mice, decreased the concentration of PGE2 in mouse formalin test. Conclusion TFL capsules has obvious analgesic effects, which was related to its inhibitory effects on peripheral inflammatory mediators PGE2.
  
  Key words:Tongfengling capsules ; analgesic effect;  prostaglandin(PGE2)
  
  近年來(lái),隨著人民生活水平的提高,飲食結(jié)構(gòu)的改變,痛風(fēng)的發(fā)病率呈現(xiàn)出不斷上升的趨勢(shì),給人們的生活與工作帶來(lái)極大的不便。痛風(fēng)靈膠囊主要由秦、防己、延胡索等組成,經(jīng)臨床證實(shí)有明顯的鎮(zhèn)痛療效。為此筆者對(duì)痛風(fēng)靈膠囊的鎮(zhèn)痛效果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,并探討其鎮(zhèn)痛的作用機(jī)制。
  
  1  實(shí)驗(yàn)材料
  
  1.1  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠,由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào):2006A017),符合SPF級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。
  
  1.2  藥物及試劑痛風(fēng)靈膠囊:本院中藥藥理教研室提供,批號(hào):20050702。冰醋酸:廣東光華化學(xué)廠有限公司,批號(hào):20041214。甲醛:汕頭市光華化學(xué)廠,批號(hào):20040316。羅通定片(30 mg/片):廣州康和藥業(yè)有限公司,批號(hào):041001。吲哚美辛腸溶片(25 mg/片):廣東華南藥業(yè)有限公司,批號(hào):050801。
  
  1.3  主要儀器YLS-6A型智能熱板儀(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站);UV-1800紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京瑞利分析有限公司)。
  
  2  方法
  
  2.1  對(duì)熱刺激引起的小鼠疼痛反應(yīng)的影響[1]  取雌性NIH小鼠,體質(zhì)量18~22 g,依次放入熱板內(nèi),仔細(xì)觀察并記錄自放入熱板至出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間作為該鼠的痛值。凡舔后足時(shí)間小于5 s或大于30 s者則棄之,共測(cè)2次,取平均值作為給藥前痛值。將篩選合格的小鼠48只隨機(jī)分為4組,分別以生理鹽水、羅通定、痛風(fēng)靈膠囊高劑量、低劑量灌胃,給藥容積為20 mL/kg,1次/d,連續(xù)給藥5 d,末次給藥后1 h、2 h測(cè)量痛值,比較各組的差異。
  
  2.2  對(duì)冰醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響[2]  取NIH小鼠64只,雌雄各半,體質(zhì)量18~22 g,隨機(jī)分為4組,分別以生理鹽水、吲哚美辛、痛風(fēng)靈膠囊高劑量、 低劑量灌胃,給藥容積為20 mL/kg,1次/d,連續(xù)給藥5 d,于末次給藥后1 h,分別由腹腔注射0.6%醋酸(0.2 mL/只)。觀察15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù),比較各組差異。
  
  2.3  對(duì)甲醛法小鼠疼痛強(qiáng)度的影響[1]  取NIH小鼠48只,雌雄各半,體質(zhì)量18~22 g,隨機(jī)分成4組,即生理鹽水組、吲哚美辛陽(yáng)性對(duì)照組、痛風(fēng)靈膠囊高、低劑量組。各實(shí)驗(yàn)組小鼠每日灌胃給藥1次,給藥容積為20 mL/kg,對(duì)照組給予等量的生理鹽水,連續(xù)5 d,末次給藥后1 h,各小鼠右后足跖皮下注射2.5%甲醛生理鹽水溶液50 μL/只,立即觀察1 min,10 min,20 min,30 min,40 min時(shí)的疼痛反應(yīng),每時(shí)間段觀察45 s,記錄該45 s內(nèi)出現(xiàn)的最高痛級(jí),并按分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定受試動(dòng)物的疼痛強(qiáng)度,比較組間差異。評(píng)分方法:舔、咬或抖足3分,提足2分,跛行1分,走動(dòng)自如0分。
  
  2.4  對(duì)甲醛致小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響[2]  取NIH小鼠48只,雌雄各半,體質(zhì)量18~22 g,隨機(jī)分成4組,即生理鹽水組、吲哚美辛陽(yáng)性對(duì)照組、痛風(fēng)靈膠囊高、低劑量組,各實(shí)驗(yàn)組小鼠每日灌胃給藥一次,給藥容積為20 mL/kg,對(duì)照組給予等量的生理鹽水,連續(xù)5 d,末次給藥后1 h,各小鼠右后足跖皮下注射2.5%甲醛生理鹽水溶液50 μL /只,24 h后處死小鼠,距右踝關(guān)節(jié)上1 cm處剪下右足, 稱重, 剝皮后浸泡于5 mL生理鹽水中1 h, 以1 500 r/min離心10 min,吸取上清液0.5 mL,加入0?5 mol/L氫氧化鈉-甲醇溶液2 mL,在50 ℃水浴箱中水浴異構(gòu)化20 min,加甲醇稀釋至20 mL,于紫外分光光度計(jì)278 nm處測(cè)定吸收值,并按下述公式計(jì)算PGE2含量:PGE2含量(μg/g)=(E278×13.13×Vt×D)/W。比較各組間差異[注:Vt=PGE2浸泡液總體積,D=稀釋倍數(shù),W=右下肢重量(g), E278=278 nm處的吸收值)]。
  
  2.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)、方差分析(ANOVA),以P<0.05為差異有顯著性。
  
  3  結(jié)果
  
  3.1  對(duì)熱刺激引起的小鼠疼痛反應(yīng)的影響  給藥2 h后,羅通定組與生理鹽水組比較,差異有顯著性(P<0.05),痛風(fēng)靈膠囊高劑量、低劑量與生理鹽水組比較差異無(wú)顯著性,表明痛風(fēng)靈膠囊對(duì)熱刺激引起的小鼠疼痛反應(yīng)無(wú)明顯鎮(zhèn)痛作用。見(jiàn)表1。
  
  表1  痛風(fēng)靈膠囊對(duì)熱板刺激引起的小鼠疼痛反應(yīng)的影響(略)
  
  Tab.1   Analgesic effect of Tongfengling capsules on the pain induced with hot plate in mice
  
  與生理鹽水組比較: **P<0.01(t檢驗(yàn))
  
  3.2  對(duì)冰醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響  吲哚美辛組,痛風(fēng)靈高、低劑量組與生理鹽水組比較,差異有非常顯著性(P<0.01),表明痛風(fēng)靈膠囊對(duì)醋酸刺激引起的小鼠疼痛反應(yīng)有明顯鎮(zhèn)痛作用。見(jiàn)表2。
  
  3.3  對(duì)甲醛法小鼠疼痛強(qiáng)度的影響[1]致炎20 min,吲哚美辛組、痛風(fēng)靈高、低劑量組與生理鹽水組比較,差異顯著,表明痛風(fēng)靈對(duì)甲醛所致小鼠第二相反應(yīng)有明顯抑制。見(jiàn)表3。
  
  表2  痛風(fēng)靈膠囊對(duì)冰醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響(略)
  
  Tab.2  Analgesic effect of Tongfengling capsules on the pain induced with acetic acid in mice
  
  與生理鹽水組比較:  **P<0.01(t檢驗(yàn))
  
  表3  痛風(fēng)靈膠囊對(duì)甲醛法小鼠疼痛強(qiáng)度的影響(略)
  
  Tab.3  Analgesic effect of Tongfengling capsules on pain reaction induced with formalin in m ice
  
  與生理鹽水組比較:*P<0.05,**P<0.01(t檢驗(yàn))
  
  3.4  對(duì)甲醛致小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響  吲哚美辛組、痛風(fēng)靈高劑量組與生理鹽水組比較,差異顯著,表明痛風(fēng)靈可降低炎癥組織中的PGE2含量。見(jiàn)表4。
  
  表4  痛風(fēng)靈膠囊對(duì)甲醛致小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響(略)
  
  Tab.4   Effect of Tongfengling capsules on PGE2 level in mouse formalin test
  
  與生理鹽水組比較:*P<0.05(t檢驗(yàn))
  
  4  討論
  
  中醫(yī)認(rèn)為,痛風(fēng)是由于脾腎虧虛,濕濁毒邪滯留肌肉關(guān)節(jié),從而引起關(guān)節(jié)腫大、畸形[3]。痛風(fēng)靈膠囊方中秦、防己、延胡索等均具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用,而且秦與延胡索配伍可增強(qiáng)其鎮(zhèn)痛作用。
  
  本文采用物理和化學(xué)刺激法實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明痛風(fēng)靈膠囊的高劑量和低劑量能抑制小鼠扭體反應(yīng),但對(duì)小鼠熱板痛無(wú)效,說(shuō)明其對(duì)外周性疼痛有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用,但對(duì)中樞性疼痛的作用不佳。
  
  甲醛疼痛刺激法為單純持續(xù)性自發(fā)痛模型,此模型只誘導(dǎo)一雙相的持續(xù)性自發(fā)痛過(guò)程,而無(wú)長(zhǎng)時(shí)程的痛超敏現(xiàn)象。小鼠足底皮下注射甲醛引起的反應(yīng)可分為兩個(gè)時(shí)相,0~10 min出現(xiàn)者為Ⅰ相(早期相),該反應(yīng)主要是直接刺激C纖維所致;10~60 min出現(xiàn)的反應(yīng)為Ⅱ相(遲發(fā)相),該反應(yīng)則由炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生、釋放引起。嗎啡類藥物能抑制兩相疼痛,抗炎鎮(zhèn)痛藥物則只能抑制Ⅱ相反應(yīng),該法可初步了解受試藥物的歸類及作用機(jī)制
  
 。4]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,痛風(fēng)靈膠囊可降低Ⅱ相痛級(jí)分值均數(shù),而對(duì)Ⅰ相反應(yīng)無(wú)抑制作用,提示其屬于抗炎鎮(zhèn)痛藥。
  
  從炎痛癥的病理生理來(lái)看,炎癥局部組織或血漿在致炎因子作用下,會(huì)產(chǎn)生和釋放一些有致痛作用的介質(zhì),如:PGE2、緩激肽、組織胺等,這些介質(zhì)通過(guò)致敏和興奮傷害性感受器末梢而引起疼痛。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,痛風(fēng)靈膠囊的高劑量組能顯著抑制小鼠炎癥組織中PGE2的產(chǎn)生,提示痛風(fēng)靈膠囊的鎮(zhèn)痛機(jī)制與炎癥組織中PGE2含量的降低有關(guān)。至于痛風(fēng)靈膠囊是否還通過(guò)抑制其它致炎介質(zhì)而達(dá)到鎮(zhèn)痛作用,則有待進(jìn)一步研究。

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