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小針刀對兔骨折愈合影響的實驗研究論文
目的 探討小針刀對骨折愈合的影響及其作用機制。方法 取健康日本大耳白兔72只，造模后隨機分為實驗組、空白對照組及干擾電流治療組；實驗組于術后第3天開始小針刀刺激骨折斷端，每周2次；空白組不做任何治療；干擾電療組于術后第1天開始每天行電刺激治療。術后7、14、28、42 d行常規X線攝片和組織學檢查。結果 從X線片、組織學檢查顯示，小針刀治療組的骨痂形成速度、骨愈合成熟程度均優于空白對照組，但與干擾電療組無明顯差異。結論 小針刀治療可促進兔骨折愈合。〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ To explore the effect and mechanism of small-needle-knife therapy for fracture coalescence. Methods Seventy-two rabbits were randomly divided into three groups as follows：experimental group, stimulating the broken end of the fracture by small-needle-knife at 3rd day after operation, two times a week; the control group accepted no treatment，and the electro-therapy group, electro-stimulating begin at 1st day after operation, one time a day. X-ray films and histological examination were made at 7th, 14th, 28th and 42nd day after operation. Results Both histological and X-ray examinations showed that the velocity of callus formation and qualities of healing process in the experimental group were significantly better than these in control group, and were not obvious difference compared with electro-therapy group. Conclusion The therapy of small-needle-knife can promote fracture coalescence in rabbits.
〔Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ〕 fracture-coalescence; small-needle-knife therapy; interference current; Healing process; rabbits格證號：SYXK(湘)2003-0001。
1.1.2 儀器 東方紅F30-IIF200maxX線攝片機（北京醫用射線機廠生產）；AO-820組織切片機（美國生產）；400倍奧林巴斯光學顯微鏡（日本生產）；小針刀為漢章牌（北京華夏針刀醫療器械廠）；自制手鋸；刺激器為調制成具有特定生理強度的干擾電流(自行設計)，其電學參數為8.0 v，電流為9 mA，頻率恒定在4 000 Hz，電極用薄銀片制成，大小為4 mm×8 mm，電極的一端焊有15 cm的絕緣導線與刺激器連接。
1.1.3 試劑 烏拉坦、慶大霉素，均由湖南中醫藥大學動物實驗中心提供。
1.2 方法
1.2.1 模型制備 實驗兔用25%烏拉坦4 mL/kg耳緣靜脈麻醉后，常規右前腿剪毛、碘伏消毒，鋪無菌單，無菌條件下切開皮膚，分離肌肉、血管、神經等，暴露橈骨，于其中部用自制手鋸橫向鋸成3.0 mm的骨缺損骨折，骨折不固定，縫合皮膚，包扎傷口。術后慶大霉素4 mg/kg肌注3 d預防感染。
1.2.2 分組與飼養 造模后隨機分成3組：實驗組、空白對照組、干擾電流組，每組24只。所有兔子進行單籠并且統一由同一飼養員飼養。
1.2.3 處理 實驗組術后第3天開始，在無菌條件下繞開皮膚切口以小針刀在骨折處前外側用搗刺和骨膜刮動（每次每法治療8下）進行刺激，每周2次，至第6周；空白對照組不做任何治療，其它處理同另外兩組；干擾電流組術后第1天開始以干擾電流在骨折斷端遠近兩側刺激兔子右前臂，1次/d，40 min/次。
1.2.4 外骨痂與骨折線評分及標本采集 分別于術后第7、14、28、42 d分別處死各組中的6只兔，拍攝X線片后取骨折局部組織，10%福爾馬林固定，乙酸脫鈣，常規制成脫鈣石蠟切片，HE染色觀察。X線讀片采用盲法，評價兩項參數根據骨折愈合過程中外骨痂和骨折線的變化規律，將外骨痂和骨折線進行如下半定量[1]：（1）外骨痂可定量為：0分：外骨膜無反應；1分：外骨膜出現了反應；2分：外骨痂大小或密度較前明顯提高；3分：外骨痂連在一起形成皮質骨橋；4分：外骨痂輕度吸收；5分：外骨痂明顯吸收；6分：外骨痂接近完全吸收，骨折處皮質骨密度接近正常皮質骨；（2）骨折線可定量為：0分：骨折線清晰無變化；2分：骨折線開始變模糊；4分：骨折線模糊未消失，但出現較牢固的連接跡象；6分：骨折線已消失，骨折線被高密度的骨痂取代；8分：骨髓腔密度開始減低；10分：骨髓腔處密度明顯減低；12分：骨髓腔完全再通，將上述兩側外骨痂和骨折線參數評分相加即為骨折愈合的X線評分。
1.2.5 統計學分析 各組數據以均數±標準差（ｘ±ｓ）表示，組間比較用完全隨機設計方差分析，使用SPSS11.5進行統計分析。
2 結果
2.1 一般情況觀察
術后動物精神狀態、食欲及活動均良好，傷口愈合良好，無死亡，小針刀及干擾電流治療順利。
2.2 小針刀對兔骨折外骨痂與骨折線X線片的影響
實驗組7 d（圖1①），骨折線模糊，骨膜反應明顯，部分可見少量外骨痂； 14 d（圖1④），外骨痂量較多，骨折間隙密度增高，部分骨折線呈現較牢固連接跡象； 28 d（圖1⑤），外骨痂開始吸收，骨折線消失，被高密度的骨痂取代； 42 d（圖1⑥），外骨痂明顯吸收，骨折處皮質骨密度接近正常皮質骨，骨髓腔完全再通。空白對照組7 d（圖1①），骨折線清晰，骨膜反應輕；14 d（圖1③），骨折線模糊，出現少量外骨痂，骨折線尚未出現牢固連接跡象；28 d，大量的外骨痂，骨折線出現牢固連接跡象，但外骨痂無吸收；42 d，骨折線消失，外骨痂開始吸收，髓腔未再通。干擾電流組照片情況和實驗組大致相同。3組參數總的評分實驗組和空白對照組有明顯的差異（P<0.05），但實驗組與干擾電療組無明顯差異(P>0.05)。見表1。
2.3 組織學檢查
３組動物的骨折愈合都經歷了血腫機化、纖維性骨痂、軟骨性骨痂、骨性骨痂４個病理階段。7 d：實驗組骨折斷端間血腫被肉芽組織取代，大部分已經機化形成纖維組織連接，骨內外膜骨樣組織增生；空白對照組，肉芽組織少，機化較差，血腫仍存在，斷端骨內外膜軟骨初現（圖2①）；干擾電療組骨折斷端血腫被肉芽組織取代，較多的纖維組織連接，骨內外膜骨樣組織增生活躍。14 d：實驗組和干擾電流組骨折斷端間纖維骨痂明顯減少，軟骨骨痂明顯增多，邊緣出現了鈣化和骨化，骨外膜增生明顯，出現大量軟骨性骨痂并且出現部分骨小梁（圖2②）；空白對照組骨折斷端主要以纖維骨痂為主，部分肉芽組織尚未完全被纖維組織取代，內外骨痂少，外骨痂較前兩組薄。28 d：實驗組骨折斷端可見大量骨小梁，并且骨小梁排列有一定方向性，且較規則，骨小梁周圍出現一層排列整齊的骨母細胞，周邊炎癥細胞消失（圖2④）；空白對照組斷端骨痂中仍有纖維組織和軟骨化骨成分，炎癥細胞仍然存在（圖2③）。42 d：實驗組骨小梁似正常大小、排列規則，髓腔改建基本完成，髓腔再通（圖2⑥）；空白對照組出現大量骨小梁，但外骨痂尚未完全橋接，骨折端外骨痂中嵌有部分纖維軟骨，髓腔改建未完成，髓腔未再通（圖2⑤）。
3 討論
綜合各項指標分析，小針刀治療組骨折愈合情況在各個時相都優于空白對照組，特別是第14天有顯著差異。但小針刀治療與干擾電流治療組無明顯差異。
在X線片上，骨折線的模糊程度基本反應了骨痂變化，采取上述評分標準，半定量分析骨折愈合情況，外骨痂評分說明骨外膜形成和塑性情況，骨折線模糊程度反應了骨痂形成及塑性變化。這個評分近似地反映骨折愈合過程的各個階段變化，從而有利于比較各組骨折愈合程度。根據外骨痂及骨折線X線片評分，實驗組愈合程度明顯優于空白對照組（P<0.05），但和干擾電流組無明顯差異。從影像上證明了小針刀治療能加速骨痂形成與鈣化，加快骨塑形，提高骨折愈合速度。
在組織學上骨折愈合都經歷血腫機化、纖維性骨痂、軟骨性骨痂、骨性骨痂4個病理階段，通過對本次實驗各個階段組織切片的觀察，實驗組和干擾電流組都能較空白對照組提前機化血腫，纖維、軟骨、骨性骨痂的生長情況都優于空白對照組，髓腔亦較后者提前再通。
小針刀作為一種物理刺激治療手段，其促進骨折愈合的機制可能是：①促進局部血液及淋巴循環，以增加病灶部位的營養，也加快了壞死和瘢痕組織的吸收［2］。實驗證實小針刀治療組炎癥消退時間，纖維性、軟骨性、骨性骨痂及破骨細胞出現時間較空白對照組提前。②加強誘導成骨［3］，通過觀察組織切片，小針刀治療組骨膜下成骨優于空白對照組，部分X片（圖2-6）顯示：通過小針刀刺激骨膜外形成骨樣贅生物。③通過對病變部位較強的刺激，以提高局部組織的興奮性，調動機體生物能康復系統，促進組織修復［4］。實驗證實小針刀治療組動物活動性和食欲較空白對照組好。④調節內分泌系統，使機體各種激素分泌處于向機體有益的方向發展［5］。⑤小針刀作用被概括為“剝離粘連、疏通阻滯、流通氣血、刮除疤痕、松解肌肉、鎮驚止痛”［6］，組織切片證實：同時相小針刀治療組血腫機化比空白對照組好，內外骨痂比空白對照組增多，骨痂吸收和髓腔再通時間亦較前者提前。
小針刀對骨折愈合的影響國內外尚未見相關報道，我們通過實驗研究發現小針刀對新鮮骨折有一定療效，同樣也開辟了小針刀的新用途并且豐富了促進骨折愈合治療的手段。
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